刺梨汁对人白血病K562细胞生长的抑制作用

陆承志

.
刺梨汁对人白血病K562细胞生长的抑制作用
.
〔摘要〕　目的　通过观察刺梨汁对人白血病K562细胞生长的影响，探讨刺梨汁的抗癌作用。方法　以细胞计数和MTT法测定刺梨汁对细胞增殖的抑制作用，以测定细胞的乳酸脱氢酶释放量作为刺梨汁对细胞的毒性作用，并以K562细胞形态的改变作为观察指标。结果　每mL培养液含1μL刺梨汁即对肿瘤细胞增殖有明显的抑制作用，每mL培养液含2μL刺梨汁抑制作用达到最大，为83.4%，再加大剂量抑制作用无明显升高，各种剂量的刺梨汁对细胞均无毒性，刺梨汁的加入使得细胞体积明显变小，细胞核形态发生改变，异染色质增多。结论　刺梨汁具有一定的抗癌作用。
　　刺梨富含维生素C、维生素E等多种维生素及SOD，其抗氧化、抗动脉粥样硬化作用已被公认［1］。近来又有报道刺梨能够阻断体内N-亚硝基化合物的合成而具有防癌作用［2］，可见刺梨是一种极有开发价值的野生药用植物。有关刺梨对肿瘤细胞体外作用的研究尚未见报道。本实验通过观察刺梨汁对体外培养的人白血病K562细胞生长的影响，以期进一步探讨刺梨的抗癌作用。
材料和方法
　　一、细胞系和培养条件：人白血病K562细胞由上海细胞所引进，在含10%胎牛血清的RPMI1640培养基中传代，每三天传代一次。
　　二、刺梨汁来源：本室用匀浆和有机溶剂萃取法从刺梨果提取。
　　三、生长曲线的测定：K562细胞0.7×105个接种于含10%胎牛血清的1mL RPMI1640培养液的24孔板(NUNC)中，并加入不同量的刺梨汁(1μL、2μL、4μL、8μL、16μL)，于5%CO2、37℃培养，分别于第2～6天计数活细胞，每个样本4孔，取其平均值，作生长曲线，以不加刺梨汁培养的K562细胞的生长曲线作对照。
　　四、生长抑制率的测定：将1μL、2μL、4μL、8μL、16μL刺梨汁作用于96孔板(NUNC)细胞中，培养48小时后，每孔加入5mg/ml MTT(Sigma)10μL，继续培养4小时，加入100μL二甲基亚砜，轻微震荡10分钟，酶联免疫检验仪577nm处测OD值。
　　生长抑制率=1-(标本OD577)/(空白OD577)
　　五、细胞毒性试验：以K562细胞释放乳酸脱氢酶(LDH)作为细胞毒指标［3］。加入刺梨汁培养48小时后，收集细胞上清，日立7150全自动生化分析仪上测定LDH含量。
　　六、细胞形态观察：将K562细胞(不含刺梨汁)，及每mL培养液含2μL刺梨汁的细胞培养72小时后电镜观察细胞形态。
　　七、数据处理：均以平均值±标准差表示，作student′s t检验。
结　　果
　　一、刺梨对K562细胞生长的影响：以不加刺梨汁的培养液中生长的K562细胞为对照组，第2～6天分别计数活细胞(表1)，作生长曲线，结果如图1所示。
　　经刺梨汁作用后，细胞体积明显小于对照组，电镜下观察发现加入刺梨后细胞核形态发生明显改变，胞内异染色质显著增多，说明细胞生长处于不活跃状态。
讨　　论
　　刺梨汁含大量维生素［7］，其中维生素C含量为1.3mg/ml，约高于弥猴桃9倍；维生素E含量为0.81mg/ml；维生素K1、B1、B2、胡萝卜素含量均较高。另外刺梨还含有丰富的SOD和刺梨多糖(PRRT)，其中SOD主要为Mn-SOD，含量达5000～6000U/ml。上海华东医院［6］对服用刺梨汁的老人进行观察，发现其天然杀伤(NK)细胞活性和红细胞SOD明显升高，而脂质过氧化物(LPO)则显著下降，胡文尧等［1］用日本大耳白兔作模型认为刺梨能通过降低脂质过氧化损伤防止动脉内膜粥样化斑块的形成，林东昕通过测定受试者尿中N-亚硝基脯氨酸(NPRO)的含量，发现维生素C和刺梨均能阻断NPRO的合成，而含等量维生素C的刺梨对NPRO的阻断率却高于维生素C。由上述可见刺梨具有清除体内自由基、降低脂质过氧化物、增强免疫功能、防止动脉粥样硬化及防癌作用。
　　我们的实验发现，刺梨汁能够明显抑制人白血病K562细胞的增殖，且在低浓度下即发生作用，最高抑制率达83.4%，经刺梨作用后细胞核形态发生明显改变，胞内异染色质显著增多，细胞生长处于抑制状态，并且细胞的毒性大大下降。这些结果表明，受刺梨作用后的肿瘤细胞在体外的分裂增殖能力降低。
　　SOD是O-2的清除剂，SOD活性下降必然导致O-2水平增高，过量O-2引起细胞DNA的损伤，而DNA的损伤是基因突变和细胞癌变的主要机制［8］。O-2在肿瘤细胞中可改变一些酶中辅基的氧化态，直接影响酶的活性，进而使代谢发生改变，导致细胞增殖、分化。刺梨抑制肿瘤细胞增殖的机理尚不明确，我们推测可能是因为刺梨中富含SOD，加入刺梨汁培养后其中的SOD部分能进入细胞内，提高肿瘤细胞中的SOD活性，以清除细胞内过多的O-2，减少了O-2对细胞的毒性，从而抑制细胞分裂、增殖。刺梨的成份复杂，除富含SOD外，尚含有其它多种维生素特别是维生素C，其作用应是多种成份协同的结果。本实验结果有可能为其抗癌作用的研究提供新的依据。（强宏娟　张春妮　陈桂媛　庄一义 中国肿瘤临床与康复2000年4期）
.

陆承志

刺梨汁对人白血病K562细胞生长的抑制作用
来源：中国肿瘤临床与康复 发布时间：2007-10-14  
　　〔摘要〕　目的　通过观察刺梨汁对人白血病K562细胞生长的影响，探讨刺梨汁的抗癌作用。方法　以细胞计数和MTT法测定刺梨汁对细胞增殖的抑制作用，以测定细胞的乳酸脱氢酶释放量作为刺梨汁对细胞的毒性作用，并以K562细胞形态的改变作为观察指标。结果　每mL培养液含1μL刺梨汁即对肿瘤细胞增殖有明显的抑制作用，每mL培养液含2μL刺梨汁抑制作用达到最大，为83.4%，再加大剂量抑制作用无明显升高，各种剂量的刺梨汁对细胞均无毒性，刺梨汁的加入使得细胞体积明显变小，细胞核形态发生改变，异染色质增多。结论　刺梨汁具有一定的抗癌作用。

　　刺梨富含维生素C、维生素E等多种维生素及SOD，其抗氧化、抗动脉粥样硬化作用已被公认［1］。近来又有报道刺梨能够阻断体内N-亚硝基化合物的合成而具有防癌作用［2］，可见刺梨是一种极有开发价值的野生药用植物。有关刺梨对肿瘤细胞体外作用的研究尚未见报道。本实验通过观察刺梨汁对体外培养的人白血病K562细胞生长的影响，以期进一步探讨刺梨的抗癌作用。

材料和方法

　　一、细胞系和培养条件：人白血病K562细胞由上海细胞所引进，在含10%胎牛血清的RPMI1640培养基中传代，每三天传代一次。
　　二、刺梨汁来源：本室用匀浆和有机溶剂萃取法从刺梨果提取。
　　三、生长曲线的测定：K562细胞0.7×105个接种于含10%胎牛血清的1mL RPMI1640培养液的24孔板(NUNC)中，并加入不同量的刺梨汁(1μL、2μL、4μL、8μL、16μL)，于5%CO2、37℃培养，分别于第2～6天计数活细胞，每个样本4孔，取其平均值，作生长曲线，以不加刺梨汁培养的K562细胞的生长曲线作对照。
　　四、生长抑制率的测定：将1μL、2μL、4μL、8μL、16μL刺梨汁作用于96孔板(NUNC)细胞中，培养48小时后，每孔加入5mg/ml MTT(Sigma)10μL，继续培养4小时，加入100μL二甲基亚砜，轻微震荡10分钟，酶联免疫检验仪577nm处测OD值。
　　生长抑制率=1-(标本OD577)/(空白OD577)
　　五、细胞毒性试验：以K562细胞释放乳酸脱氢酶(LDH)作为细胞毒指标［3］。加入刺梨汁培养48小时后，收集细胞上清，日立7150全自动生化分析仪上测定LDH含量。
　　六、细胞形态观察：将K562细胞(不含刺梨汁)，及每mL培养液含2μL刺梨汁的细胞培养72小时后电镜观察细胞形态。
　　七、数据处理：均以平均值±标准差表示，作student′s t检验。

结　　果

　　一、刺梨对K562细胞生长的影响：以不加刺梨汁的培养液中生长的K562细胞为对照组，第2～6天分别计数活细胞(表1)，作生长曲线，结果如图1所示。

　　经刺梨汁作用后，细胞体积明显小于对照组，电镜下观察发现加入刺梨后细胞核形态发生明显改变，胞内异染色质显著增多，说明细胞生长处于不活跃状态。

讨　　论

　　刺梨汁含大量维生素［7］，其中维生素C含量为1.3mg/ml，约高于弥猴桃9倍；维生素E含量为0.81mg/ml；维生素K1、B1、B2、胡萝卜素含量均较高。另外刺梨还含有丰富的SOD和刺梨多糖(PRRT)，其中SOD主要为Mn-SOD，含量达5000～6000U/ml。上海华东医院［6］对服用刺梨汁的老人进行观察，发现其天然杀伤(NK)细胞活性和红细胞SOD明显升高，而脂质过氧化物(LPO)则显著下降，胡文尧等［1］用日本大耳白兔作模型认为刺梨能通过降低脂质过氧化损伤防止动脉内膜粥样化斑块的形成，林东昕通过测定受试者尿中N-亚硝基脯氨酸(NPRO)的含量，发现维生素C和刺梨均能阻断NPRO的合成，而含等量维生素C的刺梨对NPRO的阻断率却高于维生素C。由上述可见刺梨具有清除体内自由基、降低脂质过氧化物、增强免疫功能、防止动脉粥样硬化及防癌作用。
　　我们的实验发现，刺梨汁能够明显抑制人白血病K562细胞的增殖，且在低浓度下即发生作用，最高抑制率达83.4%，经刺梨作用后细胞核形态发生明显改变，胞内异染色质显著增多，细胞生长处于抑制状态，并且细胞的毒性大大下降。这些结果表明，受刺梨作用后的肿瘤细胞在体外的分裂增殖能力降低。
　　SOD是O-2的清除剂，SOD活性下降必然导致O-2水平增高，过量O-2引起细胞DNA的损伤，而DNA的损伤是基因突变和细胞癌变的主要机制［8］。O-2在肿瘤细胞中可改变一些酶中辅基的氧化态，直接影响酶的活性，进而使代谢发生改变，导致细胞增殖、分化。刺梨抑制肿瘤细胞增殖的机理尚不明确，我们推测可能是因为刺梨中富含SOD，加入刺梨汁培养后其中的SOD部分能进入细胞内，提高肿瘤细胞中的SOD活性，以清除细胞内过多的O-2，减少了O-2对细胞的毒性，从而抑制细胞分裂、增殖。刺梨的成份复杂，除富含SOD外，尚含有其它多种维生素特别是维生素C，其作用应是多种成份协同的结果。本实验结果有可能为其抗癌作用的研究提供新的依据。（强宏娟　张春妮　陈桂媛　庄一义 中国肿瘤临床与康复2000年4期）

好看又好吃

好资料，学习了！