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本帖最后由 shanxifruit 于 2009-5-13 21:46 编辑
【内容】：《苹果砧木品种BADH基因遗传转化的研究》 王艳硕士 关键词：苹果砧木；再生；BADH基因；转化；果树学 山东农业大学;
苹果是世界上最重要的水果之一.苹果常规育种工作由于童期长、遗传背景复杂而效率较低,而植物生物技术的发展为苹果育种开辟了一条新的途径.随着现代分子生物技术的飞速发展,克隆、鉴定目的基因、将目的基因转化到植物中并获得转基因工程植株,使植物育种取得了突破性进展.该实验首先建立了苹果砧木罗6和珠美海棠的高效稳定的再生体系,研究了各个影响因子对再生频率的影响,找出最佳的组合条件,得到了较高的再生频率,为BADH基因的转入打下了良好的基础.通过农杆菌介导法将BADH基因导入叶片中,研究转化过程中的各个影响因子,优化了农杆菌介导的苹果基因转化条件,得出了最佳组合条件,得到了抗性植株.
《苹果砧木对土壤干旱胁迫的生理响应》 赵领军硕士 关键词：苹果砧木；干旱胁迫；生理响应；果树学复旦大学医学院山东农业大学;
该实验以一、二年生盆栽山定子Malus.bacctaBokh、平邑甜茶malus.hupehensispampReld、八楞海棠Malus.micromalusMakino为试格,用LCX-4型光合仪测定了果树叶片的水分利用率日变化和周期变化,用HPLC高效液相色谱仪同时测定了根系激素的变化,分析了干旱胁迫下根系激素对WUE及关参数的影响.
苹果砧木耐盐突变体的筛选及其RAPD分析孙宁硕士苹果砧木；突变体；耐盐筛选；RAPD；果树学河北农业大学;
苹果是重要的果树树种之一,主要靠嫁接繁殖,其耐盐性主要取决于砧木.因此,选择利用具有较高耐盐能力的砧木是提高苹果耐盐力的关键.利用组织培养与诱变技术相结合选育抗性突变体,可极大提高耐盐砧木育种效率,获得优良的新种质.但是经诱变和耐盐性反复筛选而获得的突变体,不排除部分个体是由环境胁迫而产生的适应性改变,而并非稳定的遗传变异.因此,突变体的鉴定是诱变育种的关键环节之一.该试验以苹果砧木M<,7>、78-48及其耐盐诱变株系为材料,对苹果砧木耐盐诱变体进行了筛选和RAPD分子标记分析,主要研究结果如下1.采用高浓度NaCl0.8％和1.0%作为选择压,对2个砧木的耐盐诱变株系进行多代交替盐筛选,获得耐盐性稳定的突变株系.2.在盐培养下对M<,7>及其5个耐盐突变株系Z<,1>-Z<,5>和78-48及其2个耐盐突变株系L<,1>、L<,2>的形态指标进行观察和测定,结果表明各突变株系的存活率高于对照,受害率和受害指数低于对照,表现较高的耐盐性.3.建立了苹果砧木稳定、高效的RAPD反应体系,即20μL体系中,模板DNA的用量约40ng,TaqDNA聚合酶用量为1.25U,引物浓度0.25μM,dNTPs浓度为0.2mM,Mg<'2+>浓度为3.0mM,1×Buffer.45个扩增循环为宜.4.该试验对M<,7>、78-48及其耐盐突变株系进行了RAPD分析.用153个引物检测到M<,7>的突变株系Z<,2>的2个多态性位点、Z<,3>的4个多态性位点和Z<,5>的1个多态性位点,而78-48的突变株系L<,1>、L<,2>多态性位点数分别为42和32个.对2个砧木及其各突变株系的多态性和遗传背景进行统计分析,结果表明,各突变株系与对照的遗传背景高度一致,但在DNA分子水平上确认发生了变异.从而证明了突变的真实性.但所检测出的多态性位点那些与耐盐性突变有关,还需作进一步研究.5.分析了苹果砧木耐盐突变体耐盐性鉴定的形态和生理生化指标,认为受害指数能够综合表现苹果砧木受盐害的程度,较准确地反映出盐胁迫对砧木的生长抑制作用,可作为描述苹果砧木耐盐性的形态学指标细胞膜透性、MDA和Cl<'—>含量、SOD和POD酶活性等生理生化指标在苹果耐盐突变筛选初期,可作为耐盐性鉴定的参考指标.利用分子标记技术,从DNA分子水平上探查突变体,是鉴定环境适应性改变和遗传突变的最准确的手段.
苹果MaluspumilaMill砧木原生质体分离技术研究 王旭静硕士 关键词：苹果砧木；愈伤组织；悬浮系；原生质体；果树学青岛理工大学河北农业大学;
进行苹果原生质体分离技术研究,对于今后开展原生质体技术在苹果砧木遗传改良上的应用将具有重要的意义.该试验由苹果砧木幼嫩胚珠、叶片诱导愈伤组织并建立了悬浮细胞系对影响原生质体分离的因素进行了系统的研究.
苹果砧木抗旱性及盐胁迫下植株中几种离子含量变化叶乃好硕士苹果砧木；水分胁迫；盐胁迫；离子分布；离子含量；果树学山东农业大学;该实验在前人研究的基础上,分别对十几种苹果砧木进行抗旱和耐盐鉴定,旨在筛选抗旱及耐盐种类,并对筛选指标进行探讨,为干旱半干旱以及盐渍化土地苹果优质生产提供参考.探讨了几种砧木对干旱的生理生化反应.为了补充前人研究试材和测定内容,于2000年春季进行8种苹果砧木的抗盐实验,砧木为两年生,盆栽沙培,浇Hoagland营养液.分为对照清水、40mmoll、60mmoll三个盐浓度梯度处理,胁迫试剂为纯Nacl溶液.
《苹果砧木平邑甜茶M.hupehensisRehd.的木质素代谢及其调控》 于明革硕士 关键词：苹果砧木；平邑甜茶；木质素代谢；羟自由基；壳聚糖；果树学山东农业大学;该试验于2001年至2003年在山东农业大学果树试验园及激素试验室进行.以1-3年生平邑甜茶M.hupehensisRehd.实生苗为试材,采用水培、土培和自然取样等方法,首先研究了平邑甜茶幼苗不同部位的木质素合成代谢基本规律,在此基础上研究了弱光对平邑甜茶幼苗叶片生长发育和木质素合成代谢的调控最后,用羟自由基和壳聚糖两种诱抗剂来调控平邑甜茶幼苗生长发育和木质素合成代谢,探讨了其潜在的应用价值.另外,还对平邑甜茶叶片超微弱发光测量方法进行了探索.
《苹果砧木遗传转化体系优化与rolB基因遗传转化研究》 李海云硕士 关键词：苹果砧木；腋芽增殖；叶片再生；遗传转化；生根；果树学吉林农业大学
;由于矮化密植具有早果、丰产等优点，已成为国内外果树，特别是苹果生产的发展趋势目前，在苹果生产中，树体矮化主要是通过选育矮密品种和采用矮化砧木来达到致矮目的，其中矮化砧是最理想的办法苹果半矮化中间砧GM256具有矮化、抗寒、抗旱、抗盐碱等优良特征，由于生根困难，只能用于做矮化中间砧，丢掉了抗旱、抗盐碱等优良性状转基因技术为苹果矮化砧的遗传改良开辟了一条新途径利用转基因技术将ro1B基因导入苹果矮化砧GM256中，极有希望获得矮化、抗寒、抗旱、抗盐碱、扦插易生根，适于矮化密植的砧木新品种由于苹果离体再生困难，极大限制了苹果的转基因改良本试验从苹果矮化砧木品种M9和GM256组织培养体系的研究着手，优化苹果矮化砧的遗传转化体系，力争建立GM256和M9的遗传转化体系主要取得以下研究结果1.稳定、高效的腋芽增殖体系研究由建立无菌体系开始，对影响初代培养的因素进行了优化结果表明，在新梢还未抽生前，最佳的接芽状态是待侧芽已露出4～5片小叶时接种新梢快速生长期4-5月是最佳的取材时期采用综合防治的方法即在初代培养基中附加0.1％的活性炭，同时结合连续转移外植体，黑暗培养，有效防止了木本植物组织培养当中普遍存在的褐化现象同时发现，GM256生长点伸长生长困难，而M9BN2MS+BA0.5mgL+NAA0.05mgL培养基中可形成带有明显茎节的植株以M9带单芽或双芽的茎段为外植体，通过正交试验筛选出适宜的腋芽分化培养基FH8MS+BA5.0mgL+NAA0.02mgL将带腋芽茎段先在分化培养基中培养7天，然后将其转入无激素培养基中促进芽的生长，腋芽分化率可达到98％，增殖倍数为5.1较大的芽被切离母体单独培养，将茎段剩余部分作继代培养，继代3次后仍有芽不断分化，增殖倍数又可提高，是一种较优的增殖途径2.不同因素对苹果离体叶片再生的影响1激素对再生的影响细胞分裂素是影响叶片再生频率的重要因子通过设计细胞分裂素和生长素组成不同的激素组合，研究了激素对叶片组织再生的影响使用细胞分裂素BA与生长素NAA组合时，叶片可膨大，随BA浓度提高，叶片产生愈伤组织的量增加使用KT与NAA组合时，叶片只是膨大，变脆，无愈伤组织的生成而将M9叶片培养在BK3MS+BA1.0mgL+KT1.5mgL+NAA0.8mgL+IBA0.5mgL分化培养基中，获得16.7％的再生频率细胞分裂素TDZ对诱导苹果离体叶片再生最有效M9叶片在适宜的分化培养基MT3MS+TDZ3.0mgL+NAA0.5mgL中获得37.6％的再生频率，而GM256叶片未再生，这也许与它的基因型有关在此培养基中再生出的不定芽不易伸长生长，且叶片形态发生改变，但将不定芽切分后转移到含有BA的培养基中，不定芽可恢复正常2糖对叶片再生的影响糖在组织培养中既是碳素来源和能量物质，又是重要的渗透压调节剂，对于离体组织的形态发生有着特殊作用山梨醇和蔗糖适宜的浓度都是30gL在30gL的浓度下，两种糖对叶片再生频率的影响无差异，但叶片在附加山梨醇的培养基中存活时间长，平均每叶再生的芽数多，但再生的不定芽矮小，生长缓慢可见，山梨醇对不定芽的分化有利，而蔗糖对不定芽的生长有利3其他因素对叶片再生的影响研究叶片放置于培养基中的方向对叶片再生的影响时，认为正放与反放对再生频率的影响不大，不定芽多产生于叶片中脉切口处与叶柄基部，叶片正放对不定芽的生长有利叶片切割方式以整叶划痕即垂直主叶脉横划三刀，但不切断叶缘的方式获得最好的再生效果叶片被切割成叶块，产生过多的愈伤组织，再生频率降低以丛生芽叶片再生出的不定芽的叶片为外植体，获得的再生频率高于丛生芽叶片3.Ro1B基因的转化1抗生素的敏感度实验通过试验发现，苹果叶片对卡那霉素特别敏感，5mgL足以抑制叶片再生培养基中附加卡那霉素40mgL时，就可抑制高度为2～3厘米的组培苗生长，使整株植株黄化，茎尖萎蔫2将高度在2～3cm的无根植株预培养在含生长素的培养基12MS+IBA0.2mgL中3天，用携带有ro1B基因的根癌农杆菌C58C1涂抹植株的基部，并将菌液滴加在培养基表面，将涂抹了菌液的植株插在刚刚滴加菌液的位置共培养3天，之后转入脱菌选培养基中继续培养，植株生根率达到20％而未经过预培养的植株生根率为5％将所获得的5株生根苗的根尖剪下提取DNA，PCR检测证明有2株根中转入了ro1B基因
《铅对苹果砧木平邑甜茶、八楞海棠的毒害机理及耐性比较研究》 连彩硕士 关键词：果砧木；铅胁迫；光合作用；抗氧化酶；植物学山东师范大学;
究采用盆栽土壤中添加铅的方法，以平邑甜茶和八楞海棠两个常规苹果砧木为试材，研究了铅胁迫对苹果砧木幼苗各器官铅含量、生长、生理生化的影响及其毒害机理，并比较了二者对铅胁迫的耐性差异主要分析了铅胁迫对苹果砧木各器官铅含量、外部形态、生长、光合特性、抗氧化系统以及氮素代谢的影响，试验结果表明1.铅主要累积在苹果砧木的根部，其在苹果砧木各器官的含量顺序为根>茎>叶在高浓度铅胁迫下，苹果砧木的生长受到显著的抑制，使得生物量、株高、根干重、冠干重、根冠比、组织含水量下降通过对冠重、根重以及根冠比的分析，发现根是铅毒害最初的受害部位2.铅胁迫引起植株叶片出现褐色斑点并伴有网状失绿症状，无论是叶绿素a、叶绿素b的含量，叶绿素总量还是叶绿素ab值都随着铅处理浓度的增大而下降，进而使净光合速率显著下降，最终导致光合产物减少，植株生长受抑3.铅胁迫会破坏植株体内的抗氧化系统，不同浓度铅胁迫处理前期均使SOD、CAT酶活性有不同程度的提高，之后两种酶的活性大幅度下降，下降幅度为2000>1000>500，表现为低浓度具有激活效应，随着铅浓度的增加及胁迫时间的延长，出现抑制效应，铅浓度越高抑制效应越明显对POD活性而言，平邑甜茶和八楞海棠的反应趋势上有差异平邑甜茶POD活性明显上升，而八楞海棠POD活性在低浓度铅胁迫下明显上升的同时，2000胁迫使其比1000胁迫略有降低，但仍高于对照即铅胁迫引起三种活性氧清除酶的酶活比不平衡同时抗氧化物质抗坏血酸和类胡萝卜素含量显著下降使得活性氧产生与清除的平衡系统被打破，导致活性氧积累，细胞膜脂过氧化加重，膜脂过氧化产物MDA积累，膜相对透性增加，膜的完整性遭到破坏，以上现象说明在铅胁迫下植株自我调节能力显著下降4.高浓度铅胁迫使植株叶片的硝酸还原酶活性和可溶性蛋白质含量下降，说明铅胁迫使植物氮素代谢紊乱，原有蛋白质的分解加快，新蛋白质的合成受到抑制，从而抑制了植株生长5.本研究土壤施铅的浓度范围内，铅胁迫对平邑甜茶和八楞海棠叶片脯氨酸含量影响不大，因而，不宜将脯氨酸含量的变化作为植物体内的氨基酸代谢是否受到重金属铅影响的指标6.通过分析铅对苹果砧木的毒害作用，结果显示，土培条件下，500mg·kg<'-1>的铅虽然使节果砧木的根干重、冠干重、根冠比略有增加、使SOD、POD、CAT活性升高，但这仅仅是铅胁迫前期的应激反应，这种前期的激活效应使植株生理代谢加强，从而促进了植株对铅的吸收，铅的累积随胁迫时间的延长最终对植株产生毒害作用500mg·kg<'-1>的铅还对苹果砧木的叶色、株高、叶绿素a含量、叶绿素b含量，叶绿素总量、叶绿素a／b值、净光合速率、类胡萝卜素含量、抗坏血酸含量、MDA含量、膜相对透性等大多数指标造成严重影响因而可将500mg·kgm<'-1>的铅确定为苹果砧木幼苗遭受铅毒害的临界浓度7．通过对苹果砧木平邑甜茶和八楞海棠幼苗期在铅胁迫下各器官铅含量、生长指标和生理生化指标的分析发现，苹果砧木种间存在对铅敏感程度和抗铅能力的差异平邑甜茶比八楞海棠具有较强耐铅毒害能力
《几种苹果砧木组织培养技术的研究》 张庆田硕士 关键词：组织培养；再生体系；苹果砧木；垂丝海棠；工厂化育苗；果树学山东农业大学;
本试验于2004-2006年在山东省龙口复发中纪和山东省林业科学院院进行，针对组织培养过程中繁殖系数低、生根率和移栽成活率低，没有形成规模化生产，达不到规模效益等问题造成生产成本高的原因进行研究，完善组培苗的生产技术工艺，对苹果砧木工厂化育苗技术体系进行了优化调整，建立起了一套实用性强的高效工厂化育苗技术体系从而有效地降低单株成本同时对观赏果树垂丝海棠的组织培养过程进行了研究为提高观赏果树的繁育速度，保证植物遗传性的一致性，做到周年连续生产并及时供应市场提供技术支持，主要结果如下1、以苹果砧木M9、M26为试材进行了无菌体系的建立，继代配方的最佳组合M9MSNH<,4>NO<,3>0.8g1，KNO<,3>2.28g1+IBA0.3mg1+6-BA0.6mg1+琼脂8g1，分化系数可达4.41M26MS+IBA0.5g1+6-BA1.0mg1+琼脂8g1，分化系数可达4.59．生根最佳培养基M912+IBA0.3mg1K<,2>SO<,4>1188mg1生根率达到84％M2612WPM+IBA0.3mg1，生根率达到98.7％M9驯化基质珍珠岩花生壳草炭=111，成活率可达到85％M26驯化基质珍珠岩花生壳草炭=111，成活率都在95％以上通过温室四季驯化和简化组培程序单株生产成本有原来的1.19元降到0.56元2、采用常规组培手段及正交设计试验对垂丝海棠Malushallianakoehne进行外植体消毒时间、快繁培养、叶片愈伤诱导、再生、生根等过程进行研究外植体最佳消毒时间75％酒精30s+0.1％升汞10min最适增殖培养基为MS+6-BA0.7mgL+NAA0.3mgL，增殖系数可达7正交设计结果显示激素对叶片愈伤组织诱导影响的因素大小为2，4-D>6-BA>NAA再生最佳配方为6-BA6.0mgL+NAA0.5mgL再生效率达91.8％最适生根培养基为12MS+IBA0.3mgL+蔗糖20gL
苹果砧木组培苗耐盐诱变及筛选技术研究 张兰硕士 关键词：苹果砧木 组培苗；耐盐筛选；NaN<,3>；变异植株；NaN<,3>处理；果树学 华中科技大学医学院 河北农业大学;
该试验对供试苹果砧木组培苗诱变耐盐筛选技术进行了研究,初步建立了诱变耐盐筛选的技术体系,并对不同诱变处理植株的耐盐性进行了比较.1.诱变采用诱变剂溶液处理和将诱变剂加入培养基处理两种方式NaN<,3>采用两种方式处理诱变效果均较好EMS采用溶液处理效果好.2.NaCl临界浓度确定用含有不同NaCl浓度的培养基对诱变植株进行初步筛选3.变异植株进一步筛选及初步鉴定植株受害指数越低、相对生物产量越高、SOD酶活性越高、MDA含量对照比越低、细胞质膜相对透性及对照比越小、Cl<'->含量对照比越小,则植株相对耐盐性越高它们均可以作为苹果砧木诱变耐盐性鉴定指标.4.变异植株耐盐性比较.<'60>Co-γ辐射处理、NaN<,3>处理、EMS处理后的变异植株均具有了一定的耐盐性其中以<'60>Co-γ辐射处理变异植株耐盐性最强. |
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发表于 2009-5-13 21:45
提升卡
置顶卡
沉默卡
喧嚣卡
变色卡
千斤顶
显身卡
发表于 2009-5-15 21:32
太专业了，有些地方还不懂
楼主
