甜樱桃胚培养育种研究进展

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来源： 《河北果树》.-2008（5）.-1-2 作者：吴雅琴等  
1  研究进展

1.1  基因型对成苗率的影响  

基因型不同，甜樱桃胚培养发芽率也存在差异。韩礼星等在同一时间采样(5月8日采样)，接入Norstog培养基，早熟品种莫莉接种120个胚，发芽率45.8%；中熟品种红蜜接种116个胚，发芽率22.4%，早熟品种胚培养的发芽率高于中熟品种。周素平等对StellaXSam、Van、FBR12T4、FBR1223F2进行胚培养，成苗率StellaXSam 42%，Van10.5%，FBR12T4 51%，FBR1223F2 7.0%。

1.2  胚龄(胚发育指数)对成苗的影响  

最佳培养时期一般用胚龄或PF值来表示，从授粉开始到剥离胚培养的时间称为胚龄，PF值则是胚的发育指数(PF=胚长/种子长)，胚龄或PF值是影响胚抢救成功的关键因素，直接影响到胚培养成苗率的高低和胚培苗的长势，应该抓住胚发育到最佳状态但又尚未败育的时期进行培养。王爱华等对甜樱桃品种拉宾斯和斯特拉种胚的离体培养进行了研究，基本培养基为1/2MS，蔗糖浓度为3%，结果表明甜樱桃胚培养的最佳取样时期为盛花后45d(PF1=0.9)。同一品种采样时间晚，其胚培养发芽率高，红蜜5月12日采样接种137个胚，发芽率42.3%，比5月8日采样的高19.9百分点。

1.3  基本培养基的选择  

找到合适的基本培养基是胚抢救成功的重要环节。甜樱桃胚培养常用的基本培养基有MS、Norstog、Tukey、改良Tukey和F14。不同品种在同一种培养基上的发芽率不同。在Norstog培养基上，莫莉(Bigarreau Moreau)发芽率为45.8%，红蜜22.4%。在改良Tukey培养基上，莫莉发芽率为76.7%，在改良Norstog培养基上，莫莉发芽率为15.0%。同一品种采样时期晚，其胚培养发芽率高。种胚发芽率以添加15mg/LGA的发芽率最高，达68.9%。李文生等用F14进行胚培养，幼胚培养F14+6-BA0.5+IBA1.0+GA1.0，胚芽继代F14+6-BA0.5+IBA0.2+GA0.2，生根F14+IBA0.5+NAA0.05，pH5.4，接种的幼胚10d后见子叶内胚芽转绿，15d后胚芽萌发，25d后丛生芽形成。

1.4  碳水化合物及培养基的渗透压  

培养基中，一般都需要一种适合的碳源，蔗糖被认为是碳水化合物的最好形式，在培养基中加入碳源，不仅是作为一种能源，并且能保持适当的渗透压。胚的发育时期不同，需要的蔗糖浓度也不同，随着胚龄的增加应适当降低蔗糖浓度，否则会对胚产生毒害作用。刘焕芳等对大樱桃远缘杂种进行胚抢救发现3.5%蔗糖比较适合增殖和继代，2%蔗糖对生根比较有利。

1.5  植物生长调节剂种类、浓度和配比  

植物生长调节剂是包括胚抢救在内的植物组织培养技术中的核心。不同品种、同一品种不同的器官、同一器官的不同发育时期以及培养阶段(愈伤组织、生芽及生根)对激素的种类、浓度和配比的要求差异很大。大樱桃杂种幼胚萌发分化阶段所需的最佳激素组合为BA2.0mg/L+IAA1.0mg/L。赵艳华等认为在红灯胚抢救过程中，BA浓度低于0.5 mg/L时胚成株率较低，高于1.5mg/L时容易引起玻璃化现象，BA1.0mg/L，与IAA0.4mg/L结合使用效果最佳。因此，在胚抢救过程中，应根据试材及不同培养阶段及时调整生长调节剂配比，以得到健壮的胚培苗。

1.6  低温处理时间对成苗率的影响  

刘焕芳等认为胚的低温处理是影响樱桃胚培养成功的关键因素。如不经过低温(1～5℃)处理常导致活力不强，萌芽率不高，易形成畸形苗。胚需低温处理的时间与品种及成熟期相关，成熟期越早的品种，种胚低温处理时间要适当延长。王爱华等认为60d和80d的低温(2～4℃)处理对于打破胚休眠效果较好；在不进行低温处理的条件下，GA3(15mg/L)对打破带种皮和不带种皮胚的休眠有作用，GA3(10mg/L，5mg/L)与BA(2mg/L，4mg/L)同时使用对打破胚的休眠更为有效；在去种皮的条件下，GA3和BA打破胚休眠的作用更为明显。

1.7  活性炭对成苗率的影响  

活性炭能有效提高试管苗质量，但对培养基中的生长调节剂有吸附作用，必须适当加大生长调节剂用量。筛选培养基中6-BA与活性炭等物质的最佳浓度组合，代替低温处理打破种胚休眠，在含有0.02%活性炭和不同浓度6-BA(2.5～12.5mg/L)的培养基中，樱桃胚萌发率很高，且正常苗率较高，其中以0.02%活性炭加10mg/L6-BA的效果最佳，萌发率为100%，正常苗率为90.1%。活性炭虽对试管苗根、茎的生长具有良好的促进作用，但同时对培养基中的生长调节剂也有吸附作用。

2  育种成效

刘焕芳等以甜樱桃为母本、中国樱桃为父本，进行种间杂交，建立了杂种胚抢救技术体系，共移栽成活178株杂交苗。李文生等以先锋(Prunus ium)×对樱(P-pseudocerasus)、CAB(P.cerasus)×对樱，通过杂种胚培养共得到8个杂交后代。梁青等进行了母本包括红灯、纳翁、先锋等3个欧洲甜樱桃(Prunus    ium L.)品种，父本包括五莲红樱桃、五莲黄樱桃及平度长把红等3个中国樱桃(P.pseudocerasus L.)品种间杂交。通过胚抢救证明不同的父母本对杂种胚萌发有很大影响。中国樱桃种子带病毒率高达90%，石荫坪等用胚培养进行抗病毒育种，选育出抗病毒优系87-39，生长健壮，果大质优，既可作为生产品种，又可作为欧洲甜樱桃的抗病毒砧木。

3  存在问题及展望

存在问题：一是对于胚败育时期极早的品种的胚抢救还没有有效的方法，胚抢救效率低，迄今为止，只有分化初器官原始胚体的胚才能在离体条件下培养成功，球形期以前的胚进行立体培养很难成活。因此要研究延迟胚败育时期的方法，延长幼胚生长，以达到适宜的胚发育指数。二是对于胚珠内控制胚胎发育的因子及其机理研究不多，在一定程度上限制了胚培养的应用。

远缘杂交由于亲缘关系较远，远缘杂交的杂种胚、胚乳和子房组织之间缺乏协调性，致使杂种胚部分或全部坏死，有时受精后的幼胚不发育或中途停止发育，难以获得杂种苗。胚抢救是克服远缘杂交亲和性差、获得杂交后代的重要手段。