葡萄组织培养育苗

shanxifruit

　　 来源：广西农业网   发布时间：2006-2-28
　　一、葡萄嫩梢采集与消毒
　　将大树或扦插苗长出5-7片叶的嫩梢，取5-10厘米长，去掉幼叶。用自来水冲洗3-5分钟，在70％酒精中浸泡30-40秒钟，用蒸馏水冲洗2-3次，再放入0.5％氯化汞溶液中消毒7一10分钟，最后用无菌水冲洗5-6次后备用。
　　二、培养基制作与筛选
　　(一)茎尖培养
　　方11／2MS培养基+6-苄基嘌呤(6-BA)0.5一lppm个荼乙酸(NAA)0.01ppm+水解乳蛋白(LH)100ppm+蔗糖2％+琼脂0.6％配制，氢离子浓度调到1585纳摩／升[pH5.8)。在98.06千帕的压力下，高压灭菌20分钟，冷凉待用。山东酿酒葡萄研究所用此方对白羽、红香蕉、白友谊、雷司令等品种茎尖培养成活率达83.5％以上。
　　方21／2MS培养基+赤霉素(GA)0.1ppm+吲哚乙酸(1BA)0.59pm+6-节基嘻吟lppm+激动素(KT)0.5ppm+硫酸腺嘌呤(Ade)4ppm+琼脂0.6％+蔗糖0.2％的培养基，对康拜尔芽变(康太)成活较好(辽宁省农科院植保所)。
　　(二)茎叶分化培养
　　方11／2MS培养基+赤霉素1ppm+吲哚丁酸0.5ppm+6-节基膘吟1ppm+蔗糖2％+琼脂0.6％，氢离子浓度调到1000纳摩／升(pH6.0)。在98.06千帕高压下灭菌20分钟后备用。辽宁省农业科学院植保所对贝达、红富土、黑奥林、巨峰品种族种成活率达90％以上。
　　方2用B5大量元素培养基+MS培养基其他元素+吲哚乙酸(1AA)0.01-0.1ppm+6-苄基嘌呤0.02-0.59pm+腺嘌呤(A)2；ppm或水解乳蛋白1000ppm+蔗糖2％-3％+琼脂0.7％，氢离子浓度630.9-1585纳摩／升(pH5.8-6.2)，配好后装入三角瓶中，用两层硫酸纸封口，在98.06-117.67千帕的高压锅中灭菌20分钟，冷凉待用。河南省园艺所用此配方对京早晶品种接种成活效果较好。
　　(三)幼根分化培养
　　方1用Bs大量元素培养基+蔗糖4％+吲哚乙酸1ppm+6-苄基嘌呤0.08ppm+琼脂7％，氢离子浓度1000纳摩／升(pH6)，经高压灭菌20分钟，冷凉备用。辽宁省农业科学院植保所用此配方对红富士、黑奥林、巨峰等品种茎尖培养的单芽段，插入灭菌后的三角瓶培养基中，芽痕高于培养基面3.5毫米，每瓶插入1-3个茎段，插后在黑暗中培养48小时；再转入间歇光照(两支40瓦日光灯下，每天光照10小时)培养，温度保持在23-28℃，20天后幼根平均长分别为99.0，86.3，78.0毫米。
　　方2用1／2MS培养基+蔗糖4％+吲哚乙酸0.4ppm+6-苄基嘌呤0.06ppm+琼脂7％，氢离子浓度1000纳摩／升(pH6)，经过高压灭菌后接种贝达、红宫土、黑奥林、臣蜂，20天后幼根平均长分别为94.0，36.5，16.8，50.8毫米。此培养基对贝达繁殖有较好效果(辽宁省农科院植保所)。
　　三、接种(茎段试管培养)
　　在超净工作台上，将彻底消毒过的备用嫩枝剪截2厘米核的单芽茎段，将其下部插入灭菌后的试管培养基中，芽痕高于培养基面3-5毫米，每管插1-3个茎段，在黑暗处培养48小时，再转入间歇光照(两支40瓦日光灯下，每天照10个小时)培养，温度保持在25-28℃，以后光照时间每天可延长12-14小时，光照强度为2000-2500勒。
　　四、继代培养
　　将试管苗剪成带叶单芽段，不必消毒，插人培养基中，一般10一15天开始生根，30-35天可长成5.6片叶的小苗，在适宜条件下，1年可繁殖数万株试管苗。
　　五、炼苗移栽
　　试管苗长成后移到温室或塑料大绷里，在自然光照下炼苗。要求温度在20-25℃，经两周后将试管塞揭开，使之接受自然光照、温度、湿度锻炼4-5天。用镊子夹叶柄将小苗从培养基中取出，洗去培养基残留物，直接栽入温室或大棚中的小拱棚里的砂壤土或粗砂里，浇透底水。棚内湿度保持在90％左右。10厘米下的地温应稳定在15℃左右，光照为4000-5000勒。15-20天后见幼叶变绿时，即可移植到大田，成活率达80％以上。如棚内温度过高，要通风和盖苇帘遮荫降温，喷洒凉水，提高棚内空气湿度和土壤湿度，以保持炼壮苗的适宜条件。
　　

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