水果邦农人之家

 找回密码
 加入农人之家大家庭

QQ登录

只需一步,快速开始

查看: 3062|回复: 0

香蕉苗圃

[复制链接]

参加活动:0

组织活动:0

397

帖子

31 小时

在线时间

1

好友

小学五年级

Rank: 6Rank: 6

UID
156
鲜花
601 朵
农币
1598 枚
发表于 2008-1-21 13:13 | 显示全部楼层 |阅读模式 来自: 中国北京

马上加入农人之家,结交更多农友,享用更多功能,让你轻松玩转。

您需要 登录 才可以下载或查看,没有帐号?加入农人之家大家庭

x
苗圃是香蕉组织培养苗繁育生产中室外生产培育的场所。选择苗圃地时首先要选择向阳、背风、有丰富的水源的地方;其次要考虑到交通方便,利于苗木的运输;第三要求苗圃地周围环境卫生良好,即在苗圃地周围不允许有束顶病毒(BBLV)和花叶心腐病毒(CMV)病源存在,因此苗圃地应远离蕉园,尤其是旧蕉园,也应避免靠近一些黄瓜花叶病毒的寄生作物,如茄子、辣椒、瓜类、豆科作物等。
    苗圃地的主要设施有玻璃温室(网室)和塑料大棚。一般玻璃温室较为昂贵,但使用起来较方便,效果也好。玻璃温室可由专业单位承建,塑料大棚可到有关厂家购买或自搭。购买的大棚有各种规格,而自搭的可根据需要设计,但要求有一定的空间,一般以高2.0-2.5米、宽5.0-6.0米、长30米较为合适。无论是玻璃温室或棚一般应配有庶阳的设施(如遮阳网),并装有62目/平方厘米的防虫网。
    根据试管苗在苗圃中不同的培养阶段,可把苗圃分为一级苗圃(用于试管苗苗床假植培育,也叫假植圃)和二级苗圃(用于假植苗移栽于营养袋培育)。为了提高试管苗移植时的成活率,一级苗圃应用玻璃温室较好。
    2、培养基及其配制
    培养工应含有植物生长所必需的苗头元素等4大类物质。
    ① 无机营养物:这些无机营养物共包括15种元素,如氮、磷、钾、钙、镁、硫、铁、硼、锰、铜、锌、钼、氯、碘、钴等。其中前6种为大量元素,后9种为微量元素。
    ② 有机物质:主要有两类。一类是有机营养物质,为香蕉植物细胞提供碳、氢、氧和氮等必人元素,如糖类(蔗糖)、氨基酸类(如甘氨酸);另一类是一些生理活性物质,在香蕉代谢中起一定作用,如硫受素、吡哆醇、烟酸、肌醇等。
    ③ 植物生长调节物质:主要为植物天然的5类激素物质,以及人工合成的类似生长激素物质,如萘乙酸(NAA),吲哚乙酸(IAA)、吲哚丁酸(IBA)、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、6-呋喃氨基嘌呤(Kt)、6-苄氨基嘌呤(6-BA)等。
    ④ 其他附加物质:这些物质不是植物细胞生长所必需的,但对细胞生长有益,如琼脂活性炭等。
    (3) 基本培养基
    到目前为止,香蕉组织培养所采用的基本培养基多为MS(1962)培养基。理将MS(1962)基本培养基的成分及其浓度介绍如下。
    ① 含大量元素的常用溶液(毫克/升)
    NH4NO3 1650
      KNO3 1900
CaCI2·2H2O 440
MgSO4·7H2O 370
     KH2PO4 170
    ② 含微量元素的常用溶液(毫克/升) ③常用有机溶液(毫升/升)
     KI 0.83 甘氨酸 2.0
   H3BO3 6.2 盐酸吡哆锌 0.5
MnSO4·H2O 22.3 盐酸硫胺素 0.4
ZnSO4·7H2O 8.6 烟酸 0.5
Na2MoO4·2H2O 0.25 肌醇 100
CuSO4·5H2O 0.025
CoCI2·6H2O 0.025
Na2-EDTA 37.3
FeSO4·7H2O 27.8
    (3)培养基的配制
    ① 母液的配制与贮存:在香蕉大规模生产组织培养苗中,为了配制培养方便,一般要把培养基中各咱成分预先配成高浓度的母液,在配制培养基时按比例吸样,然后稀释即可。
    a.MS(1962)培养基母液的配制方法,具体见表2。
    表2 MS(1962)培养基母液配制方法

序号 药品名称 扩大倍数 扩大后称量 配1升培养基吸量(毫升)
Ⅰ NH4NO3KNO3CaCI2·2H2O 50 82.5(克)95.0(克)22.0(克) 10
Ⅱ MgSO4·7H2O 50       18.5(克)        10
Ⅲ   KH2PO4     50     8.5(毫升)       10
Ⅳ MgSO4·7H2OZnSO4·7H2OH3BO3KINa2MoO4·2H2OCoCI2·6H2O CuSO4·5H2O 100 2230(毫升)860(毫升)620(毫升)学83(毫升)25(毫升)2.5(毫升)2.5(毫升) 5
Ⅴ FeSO4·7H2O Na2-EDTA 100 2780(毫升)3730(毫升) 5
Ⅵ 甘氨酸烟酸盐酸吡哆锌盐酸硫胺素 肌醇 100 200(毫升)50(毫升)50(毫升)40(毫升)10(克) 5
注:各种母液的配量均为500毫升
    b、植物生长调节剂母液的配制方法:每种植物生长调节剂都必须单独配成母液,在香蕉组培中中,一般用量为0.1×10-6-8.0×10-6,所以可根据所使用的浓度先配成高浓度(100×10-6-500×10-6)的母液,在配制培养基时根据浓度要求,吸样后稀即可。一般植物生长调节剂不溶于水,具体配法如下。
IAA、IBA、NAA先溶于少量95%酒精,再中水定溶到一定浓度。
    2,4-D可用摩尔浓度的NaOH溶解后,再加水定溶至一定浓度。
    Kt、6-BA可先溶于少量1摩尔浓度的HCI中,再加水定溶至一定浓度。
    各种母液配制后均必须存放于4-10℃的冰箱中。
    ② 培养基的配制方法:现以配制4000毫升MS(1962)培养基为例。
    a.溶化琼脂:量取水2000毫升,加入所需的琼脂(24-32克)、加入糖(80-120克)后置于锅中,放在电炉上加热,直到琼脂完全化成琼脂液。
    b.量取母液:ⅠⅡⅢ各40毫升;ⅣⅤⅥ各20毫升,并量取所需加入的生长调节剂母液。
    c.混合:把母液和琼脂混在一起,并加入其他附加物,最后加入至4000毫升,用1摩尔CHI或1摩尔aOH把PH值调至5.8。
    d.分装:将配好的培养基分装于瓶内,并封好瓶口
    e.灭菌:用高温高压灭菌,一般在压力108千帕、121℃下灭菌约20分钟。请注意:灭菌时间短,易引起污染;时间长,会引起培养式有机成分分解失效。
    f.放置备用:待冷却后,及时把培养基取出,平放于培养基贮放室的培养架上,备用。
    3、操作技术
    香蕉组织培养工作的全过程操作技术大致可包括下列几个方面。
    (1)玻璃器皿的清洗
    香蕉组织培养用的各种玻璃器皿,尤其百培养瓶和盛培养基的器皿,一定要严格清洗耳恭听,以防油污。如重金属离子、酸大碱等有害物质残留在瓶内,会影响培养物的生长。
    使用过的玻璃器皿的应及时清洗,先将污物(如培养基、培养物)倒掉,再浸入水中,然后洗涤。
玻璃器皿的洗涤,可根据器皿的污染程度和性质,采用没方法进行洗涤。洗涤剂一般采用洗衣粉或洁精等。
    凡有微生物污染的器皿,必须先进行高压消毒,以杀死菌体,否则会污染环境,给组织培养带来严重困难。
    器皿洗净后,应烘干或晾干,放在规定的地方,以便于取用。
   (2)培养基的配制
    具体培养基的配制方法已如前述,不再重复。但在配制培养基时要避免各种成分的错漏,并注意PH镇的调节。
   (3)接种室与用具消毒
    接种室是进行无菌操作的地方,对无菌剽窃很严格的,室内要求十分洁净。因此,不仅在接种前要用紫外线照射20分钟以上,而且要时常用福尔马林和高锰酸钾进行薰蒸消毒,或喷酒精雾,新洁尔灭等杀菌。超净工作台上最好也能安上紫外线灯,用于接种前消毒。
    工作人员进入拉种室时,一定要换上下班消毒过的衣服、帽子、口罩等,手也要用酒精经常消毒。
器皿和工具都应经高温高压灭菌,在无菌条件下开包,用的工具(如解剖刀、镊子)要随时用70%酒精浸洗,并在酒精灯上高温灭菌,每用一次都要重新在酒精灯上灭菌。
   (4) 材料灭菌
    材料灭菌指香蕉组织培养工作中的外植体材料的消毒灭菌。作为香蕉组织培养中的外植体材料主要是吸芽苗。由于吸芽苗埋于土壤中,杂菌污染十分严重,要彻底消毒灭菌是十分困难的,一般在消毒灭菌剂中浸泡的时间要比较长。从文献资料来看,香蕉外植体材料日常用的消毒灭菌剂多采用升汞,也有个别采用次氯酸纳、漂白粉(见表3)。
    表3 香蕉外植体材料常用消毒剂及其效果
    消毒剂 使用浓度(%) 消除准备 消毒时间(分) 效果
     升汞    0.1-0.2      较难      7-15       最好
   次氯酸钠    2-5         易       20-30       好
    漂白粉   饱和溶液       易       20-30      很好
    消毒灭菌后,必须用无菌水浸洗多次,一般采用升汞的要浸洗6-8次,其他消毒剂为3-5次,才能把消毒剂去除干净,以减少地外植体材料的伤害。
    (5) 无菌操作
    香蕉组织培养是一种无菌技术,不仅要求整个操作过程,以及一切用具、材料、培养基都是无菌的,培养室、接种室、工作人员的衣物都尽量要求干净、无菌,同时工作人员产在操作过程中要遵守无菌操作规程,要严格遵守如下规定。
    ① 入接种室前,要洗手,去除指甲中的污物。
    ② 入室时要穿上经过消毒的工作服、帽子、口罩和鞋子等。
    ③ 工作人员操作前要用70%-75%酒精擦洗手,操作中要经常用酒精擦洗手。不准讲话, 亦不准对着操作区呼吸,以免微生物污染材料、培养基和用具。每次重新操作都要把工具放在酒精灯火焰上消毒。
    ④ 必须在酒精灯火焰处进行操作,如打开瓶口、转接材料等。盖瓶盖前应将瓶口在火焰上烧灼一下,再将盖子也在火焰上烧的一下,然后盖上。
   (6) 无菌培养
    培养室内要求洁净。进入培养室要换上干净的拖鞋,尽量减少人和物品的随便出入,要定期用福尔马林等消毒剂消毒灭菌。
    保持司温和控制光照。香蕉组织培养要求的温度为25-32℃,一般夏秋季可用空调机来降低室内温度,冬春季可用空调机或热风器,以提高室内温度。控制光照可在培养架上装上日光灯,根据不同培养阶段对光照的要求,用人工或定时器控制光照强度与光照时间。
    (7) 定期检查观察
    对经接种培养的材料,应定期进行观察,一般3-5天观察检查一次,主要是检查接种后的污染情况和接种材料的生长情况,并作必要的记载,以便于对培养状况进行评价与分析,不断地提高香蕉组织培养的技术水平。

本版积分规则

QQ|手机客户端|关于我们|联系我们|规则制度|隐私政策|小黑屋|活动|水果邦 ( 京ICP备06047721号-4 )

GMT+8, 2024-3-29 18:06 , Processed in 0.024854 second(s), 26 queries , Redis On.

Powered by Discuz! X3.4

Copyright © 2001-2020, Tencent Cloud.

快速回复 返回顶部 返回列表